广东11选5

电泳技术在医学中的应用

自从1946年瑞典物理化学家Tiselius教授研制的**台商品化移界电泳系统问世以来,在近半个多世纪的时间里,电泳技术发展极其迅速。基于电泳原理的各种仪器设备不断问世,特别是20世纪80年代后, 许多自动化电泳仪广东11选5器相继为临床实验室所采用,电泳技术已成为基础医学和临床医学研究的重要工具之一。 目前,该技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、有机物、无机离子等的分离和鉴定,甚**病毒与细胞的研究。特别是电泳所用支持介质由流动相改为固相支持物后,各种各样的电泳分析装置不断推出以适应不同教学、临床和科研工作的需要。当今,电泳技术与质谱技术联用在后基因组学研究中,正发挥者着巨大的作用,为临床检验的发展带来新的生机与活力。

一、电泳分析仪 
广东11选5      电泳分析仪可分为两大类:临床实验室常规类,如全自动荧光/可见光双系统电泳仪、全自动醋纤膜电泳仪、全自动琼脂糖电泳仪和全自动琼脂糖电泳仪;科研为主兼做临床样本类,如双向电泳及双向电泳2液相色谱2质谱联用、高效毛细管电泳及高效毛细管电泳2质谱联用、高效毛细管芯片电泳、DNA测序系统。

1. 全自动荧光/可见光双系统电泳仪:具有荧光/可见光双系统,在使用荧光试剂项目如肌酸激酶(CK) 、乳酸脱氢酶(LD)同工酶时为全自动。只需将样品、试剂、琼脂糖凝胶电泳胶片放好后,操作人员可离机完成试验并得到结果,此为全自动电泳仪。但是使用可见光项目如蛋白电泳,中途人员需返回,将电泳胶片由电泳槽广东11选5放入染色系统中才可完成试验。而**大优点是荧光系统全自动且灵敏度高,准确度高并且采用高压、低温系统,只需要20 min即可完成电泳分析,速度非常快。

2. QUANZIDONGCUXIANMODIANYONGYI:WEIKEJIANGUANGDANXITONG,SHIYONGCUXIANMODIANYONGPIAN。ZIDONGHUACHENGDUGAO,ZHIXUJIANGYANGPIN、SHIJI、DIANYONGPIANFANGHAO,RENYUANKELIJIWANCHENGSHIYANDEDAOJIEGUO。DANSHIYINWEISHIYONGCUXIANMOZHISHILINGMINDUDI,WUFAFENXINIAODANBAI/NAOJIYEDANBAI,DUITONGGONGMEIFENXIXIAOGUOYEBULIXIANG,DUOBANSHIYANSHIZHIYONGYUXUEQINGDANBAIDIANYONGFENXI。

3. QUANZIDONGQIONGZHITANGDIANYONGYI:WEIKEJIANGUANGDANXITONG,SHIYONGQIONGZHITANGNINGJIAODIANYONGJIAOPIAN。YOUDIANWEILINGMINDUGAO,KESHIYONGYUDINONGDUDANBAIJIANYAN,RUNIAODANBAIJINAOJIYEDANBAI。ERTONGGONGMEIDEFENLIXIAOGUOYEXIANGDANGBUCUO。DANQUEDIANWEIZIDONGHUACHENGDUJIAOCHA,DANGDIANYONGJIESHUHERANSETUOSEWANCHENGHOU,GONGZUORENYUANBIXUJIANGDIANYONGPIANYOUJIQIZHONGQUCHU,DUISHIYANSHIJIAOWEIMAFAN。DANSHIYINWEIZHEILEIYIQISUONENGZUOXIANGMUBIJIAODUO,QIELINGMINDUJIAOGAORENGWEIXUDUOSHIYANSHISUOJIESHOU。

广东11选5 4. QUANZIDONGDIANYONGFENXIXITONG:JISHANGSHUYIQIDEYOUDIAN,ZIDONGDIANYANG、DIANYONG、CHENGSE(HUORANSE、TUOSE) 、HONGGAN。KEYONGGEZHONGDIANYONGPIAN,BAOKUOQIONGZHIPIAN、CUSUANPIAN、JUBINGXIXIANANDENG,CAIYONGKEJIANGUANGJIYINGGUANGCHENGSESHUANGXITONG,SHIYIZHONGJIAOLIXIANGDEDIANYONGYI。

5. 双向电泳及双向电泳2液相色谱2质谱联用:双向电泳**向为等电聚焦,第二向为梯度十二烷基磺酸钠( SDS)电泳。样品经过电荷与质量两次分离后可得到分子的等电点、分子量等信息,这是目前所有电泳技术中分辨率**高,信息量**多的技术,已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具。自1975年,O′Farrel等建立这种技术后,已有许多改进,使得这一技术日趋完善。ISO2DALT系统的**向是用管状凝胶,虽然分辨率高、上样量大、耐高盐等优点,但有阴极漂移而丢失碱性蛋白、载体两性电解质pH梯度不稳定、受电场和时间影响而重复性不好等缺点。20世纪80年代后期, Gorg等将固相pH梯度等电聚焦技术用作双向电泳的**向,称为IPG2DALT。固相pH梯度等电聚焦没有阴极漂移, pH梯度稳定,分辨率高,重复性好,是目前流行的双向电泳技术。与传统的单向电泳方法**多只能分析100种蛋白质样品相比,双向电泳**多可分析5 000 ~ 10 000个蛋白点的图谱。双向电泳在分离蛋白混合样品,比较差异方面有不可替代的作用。当发现新的蛋白点时,将其切下再用液相色谱分离,与质谱联用,**后可鉴定新发现的蛋白质组分。 
 
6. 高效毛细管电泳及高效毛细管电泳2质谱联用:高效毛细管电泳是以弹性石英毛细管为分离通道,以高压直流电场为推动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。利用毛细管代替平板凝胶,分离效率得以提高。高效毛细管电泳的应用范围从小分子、无机离子到生物大分子,甚**整个细胞,从带电粒子到中性分子都可用高效毛细管电泳方法进行分析。目前,毛细管与质谱的接口难题已经解决,人们能利用毛细管电泳的高效分离能力与质谱的鉴定技术联用发挥其特殊功能,发现未知的化合物。尤其是阵列毛细管电泳仪已经问世,这将克服目前大多数商品化毛细管电泳仪只能进行单根毛细管电泳的缺陷,这种高通量的新方法将会给后基因组时代的基因分析带来革命性的变化。

7. MAOXIGUANDIANYONGXINPIAN:LIYONGMAOXIGUANDIANYONGXINPIANKEYIJINXINGDNAZHANGDU、XULIEHEJIYINFENXINGDENGFENXI,ZAILINCHUANGJIANCE,YOUQIZAIYICHUANBINGDEZHENDUANZHONGJUYOUZHONGYAOYIYI。XIANZAIFENLIDNA,SHILIYONGXINPIANFENLIYINGGUANGBIAOJIDEGUAHEGANSUAN,ZHENGGEFENLIGUOCHENGZAI45 sZHINEI,ERXINPIANDEZHANGDUJINWEI318 cm。YINWEIQIKECHENGZAIGAODIANYA(2 300 V / cm)BINGJUYOUJIAOXIAODEYANGPINTIJI,GUYOULIYUDEDAOJIAOHAODEFENLIXIAOGUO。ERYONGCHUANTONGDEMAOXIGUANDIANYONGFENLIJISHUFENLIDNAYANGPIN,TONGCHANGXUYAO10~30 min,DIANYAYEZHINENGJIADAO500 V / cm。LINGWAIYOURENZHIZUODEYONGYUGAOSUDNAFENLIDEXINPIAN,YOUXIAOZHANGDUJINWEI315 cm,FENLICONG70~1 000bpDEDNA PIANDUAN,SHIJIANZAI120 sYINEI。MUQIAN,GAOSU、GAOTONGLIANGDEMAOXIGUANDIANYONGXINPIANYIJINGFAZHANDEBIJIAOWANSHAN。2002NIANBIZHECENGZAIRUIDIANZHAOKAIDEDISHIWUJIEGUOJIWEILIANGFENLIYUFENXIHUIYISHANGJIANDAOCaliperGONGSISHEJIDEDNADIANYONGXINPIAN,JIZAIYIGEGUANGPANDAXIAODEXINPIANSHANGYOU96GEMAOXIGUANDIANYONGZHENLIE,FENBIEYU96GEYANGPINCHIXIANGLIAN,CHENGFUSHEZHUANG,BINGCAIYONGYIGEXUANZHUANDEGONGJUJIAOYINGGUANGJIANCEXITONGDUIXINHAOJINXINGJIANCE。CIXITONGKEYITONGSHIDUI96GEBUTONGDEYANGPINJINXINGFENLI,FENLIJIANCEGUOCHENGZAI8 minYINEI。

广东11选5 8. DNACEXUXITONG:GAIXITONGLIYONGNINGJIAOMAOXIGUANDEYUANLI,JIANGDUODAOMAOXIGUANZHENLIESHEJI,YONG4ZHONGBUTONGDEYINGGUANGRANSEBIAOJI4ZHONGHEGANSUAN,ZAIMOBANSHANGHECHENGDNADANLIAN,RANHOUZAIDNAWAIQIEMEIDEZUOYONGXIAJINXINGJIANJIDELIANXUSHUIJIEHESHIFANG,YONGJIGUANGSHIBIEHEJILUSHIFANGDEJIANJI。KEYONGYUDNAXULIECEDING,ZAHEZIZIDONGJIANCE,DIANTUBIANFENXI,DENGWEIJIYINJIANDING, SNPSHAICHA,ZAHEXINGQUESHIJIANCE,AFLPZHIWENTUPU,WEIWEIXINGDNADEBUWENDINGXINGFENXI,JIYINBIAODA,CEXUZHILIANGPINGGU,XULIEBIJIAODENG。20SHIJI90NIANDAIZHONGQI,CEXUYIZHONGDAGAIJIN,JISHUHUADEMAOXIGUANDIANYONGDAITININGJIAODIANYONG。2001NIANWANCHENGRENLEIJIYINZUKUANGJIATUTIQIANWANCHENGDEYIYUDUOTONGDAO、JISHUHUADEMAOXIGUANNINGJIAODIANYONGJISHUDECHUXIAN。MUQIAN,ZAIWOGUOYIYOUSHAOSHUYIYUANKAISHICAIYONG8 TONGDAODEDNACEXU,XITONGKAIZHANYONGLAMIFUDINGZHILIAOYIXINGGANYANBINGDU(HBV)DEYMDDTUBIANJIANCE。

二、电泳技术临床应用 
     随着新的电泳技术的出现,各种自动化电泳分析仪问世并相继被引入临床实验室,电泳技术在临床疾病的诊断中正发挥越来越多的作用,特别是为各种体液蛋白质、同工酶等的检测提供了新的手段。 
广东11选5 1. 血清蛋白电泳:新鲜血清经醋酸纤维薄膜或琼脂糖电泳、染色后,常见白蛋白、α1、α2、β和γ球蛋白5条带。血清蛋白质电冰图谱是了解患者血清蛋白质全貌的有价值的方法,可用为初筛试验。急性炎症或急性时相反应时常以α1、α2 区带加深为特征;妊娠型α1 区带增高,伴有β区带增高;肾病综合征、慢性肾小球肾炎时呈现白蛋白下降,α1、β球蛋白升高;缺铁性贫血时可由于转铁蛋白的升高而呈现β区带增高,而慢性肝病或肝硬化呈现白蛋白显著降低,γ球蛋白升高2~3倍,示免疫球蛋白( Ig)多克隆高,甚**可见β~γ桥,还可在γ区呈现细而密的寡克隆区带;单克隆Ig异常症(M蛋白血症)则在电冰区带α~γ区呈现致密而深染,高度集中的蛋白克隆增生区带(M蛋白区带) 。

2. NIAODANBAIDIANYONG:NIAODANBAIDIANYONGDEZHUYAOMUDESHIZAIWUSUNSHANGDEQINGKUANGXIA,XIEZHULINCHUANGPANDUANSHENZANGBINGBIANDEYANZHONGCHENGDU。DANGBUNENGJINXINGSHENHUOJIANSHI,NIAODANBAIDIANYONGJIEGUONENGHENHAODIXIEZHULINCHUANGPANDUANSHENZANGDEZHUYAOSUNHAI。NIAODANBAIDIANYONGHOUCHENGXIANCHUZHONG、GAOFENZIDANBAIQUDAIZHUYAOFANYINGSHENXIAOQIUBINGBIAN,CHENGXIANCHUDIFENZIDANBAIQUDAIKEJIANYUSHENXIAOGUANBINGBIANHUOYICHUXINGDANBAINIAO(RUBENZHOUDANBAI) ;HUNHEXINGDANBAINIAOKEJIANDAOGEZHONGFENZILIANGQUDAI,SHISHENXIAOQIUHESHENXIAOGUANJUNSHOULEIJI。DUILINCHUANGZHENGZHUANGBUDIANXINGDEHUANZHEJIWEILIANGDANBAINIAOHUANZHEDEZHENDUANJIGEZHONGSHENZANGJIBINGZHILIAOGUOCHENGZHONGBINGQINGDEDONGTAIFENXIYEJUYOUHENDAJIAZHI。

3. 脑脊液蛋白电泳:若在脑脊液(CSF)标本中检出寡克隆区带,而其相应血标本中未能检出区带,反映是由中枢神经系统本身合成的Ig,具有重要临床意义。但为保证正确的比较与分析,须将患者血清和CSF在同**同步进行分析,以论证不同来源的Ig。中枢合成Ig是中枢神经系统疾患的一个重要信号,主要用于多发性硬化症、痴呆、脊髓炎、亚急性脑白质炎、神经性梅毒等中枢神经系统疾患的诊断和鉴别诊断。 
 
广东11选5 4. 血红蛋白及糖化血红蛋白电泳:应用电泳法鉴别患者血液中Hb的类型及含量对于贫血类型的临床诊断及治疗具有重大意义。HbA2 增高是β2轻型地中海贫血的一个重要特征, HbA2 减低见于缺铁性贫血及其他Hb合成障碍性疾病(常见如α2地中海贫血) 。电泳发现异常Hb如HbC、HbD、HbE、HbK和HbS等则可诊断为相应的Hb分子病。在酸性条件下电泳,可将糖化血红蛋白的不同组分HbA1 a, HbA1 b和HbA1 c分离开来, HbA1 c形成与RBC内葡萄糖有关,可特异性反映测定前6 ~ 8周体内葡萄糖水平。此外,糖化血红蛋白可对某些患者因HbF增高所造成HbA1 c假性升高作出解释。

5. MIANYIGUDINGDIANYONG:KEDUIGELEIIgJIQIQINGLIANJINXINGFENXING,**CHANGYONGYULINCHUANGCHANGGUIMDANBAIDEFENXINGYUJIANDING。YIBANYONGYUDANKELONGIgZENGZHIBING、DANKELONGIgBING、BENZHOUDANBAIHEYOULIQINGLIANBING、DUOZUFENDANKELONGIgBING、ZHONGLIANBING、CSFGUAKELONGDANBAIJIANBIE、DUOKELONGIgBINGDEZHENDUANHEJIANBIEZHENDUAN。

广东11选5 6. TONGGONGMEIDIANYONG:LINCHUANGSHANGYONGYUTONGGONGMEIHUOTONGGONGMEIYAXINGFENXI。(1)RUSUANTUOQINGMEI(LD /LDH)TONGGONGMEI:YONGQIONGZHITANGNINGJIAODIANYONG(AGE)FAKEFENLICHU5ZHONGTONGGONGMEIQUDAI(LD1 ~LD5 ) 。ZHUYAOYONGYUJIXINGXINJIGENGSI(LD1 >LD2 )JIGUGEJIJIBING(LD5 SHENGGAO)DEZHENDUANHEJIANBIEZHENDUAN。EXINGZHONGLIU、GANYINGHUASHIKEJIANLD5 MINGXIANSHENGGAO,HUOZAIXIONGFUSHUIZHONGCHUXIANYITIAOYICHANGLD6QUDAI。(2)JISUANJIMEI(CK)TONGGONGMEI:CAIYONGAGEFAKEFENLICHU3ZHONGCKTONGGONGMEI。DANGCHUXIANYICHANGTONGGONGMEIRUJUJISUANJIMEI1 (CK1 ) 、JUCK2 DENGSHI,CONGDIANYONGTUPUSHANGHENRONGYIFAXIAN。CK2MBZAIXINJIGENGSIZAOQIZENGJIAHEDUANSHIJIANNEIDAFENGZHIYESHIXINJIZAIGUANZHUDEZHIZHENG。CK2BBZENGGAOJIANYUNAOJIAOZHIXIBAOLIU、XIAOXIBAOFEIAIHEWEICHANGDAOEXINGZHONGLIU,HOUZHEHAICHANGYOUCK2MtZENGGAO。 (3) CKTONGGONGMEIYAXING:ZHICK2MMYAXING(CK2MM1、CK2MM2、CK2MM3 )HECK2MBYAXING(CK2MB1、CK2MB2 ) ,CHANGCAIYONGQIONGZHITANGNINGJIAOIEFHUOGAOYADIANYONG。CAIYONGQIONGZHITANGNINGJIAOGAOYADIANYONGKEJINXINGCKTONGGONGMEIYAXINGDECHANGGUIKUAISUFENXI,YONGYULINCHUANGZAOQIXINJISUNSHANGDELINCHUANGZHENDUANYUJIANBIEZHENDUAN。ZHUYAOYONGYUJIXINGXINJIGENGSIDEZAOQIZHENDUAN,YEKEYONGYUQUEDINGXINJIZAIGUANZHU、RONGSHUANZHILIAOHOUDEBINGQINGGUANCHA。(4)JIANXINGLINSUANMEI(ALP)TONGGONGMEI:KECAIYONGAGEFAJINXINGALPTONGGONGMEIDECHANGGUIKUAISUFENXI。GANWAIZUSAIXINGHUANGDAN、ZHUANYIXINGGANAI、GANNONGYANGHEDANSHIZHENGSHIDANZHIALPJIANCHULVHENGAO,BINGBANYOUGANALPZENGJIA,ERGANNEIDANZHIYUJI、JIXINGGANYAN、YUANFAXINGGANAIDENGZHUYAOBIAOXIANWEIGANALPZENGDUO,DADUOSHUBUCHUXIANDANZHIALP。JIAKANG、EXINGGUSUNSHANG、GOULOUBING、GUZHE、ZHIDUANFEIDAZHENGSUOZHIGUSUNSHANGDENG,JUNYINQIGUALPTONGGONGMEIZENGJIA。GUALP、GAOFENZIALPTONGGONGMEIDUIEXINGZHONGLIUGUZHUANYIHUOGANZHUANYIDEYANGXINGYUSHIZHIJIAOZONGALPGAO。WEICHANGDAOZHONGLIU、FEIAIDENGEXINGZHONGLIUSHICHUXIANLEICHANGXINGALP。(5)γ2GUANXIANZHUANTAIMEI(γ2GT/GGT)TONGGONGMEI:YONGCAEHUOAGEFAKEJIANGγ2GTTONGGONGMEIFENLIWEIγ2GT1 ~γ2GT4 ,ZHENGCHANGRENZHIJIANγ2GT2 HEγ2GT3 ,ZHONGZHENGGANDANJIBINGHEGANAISHICHANGYOUγ2GT1 CHUXIAN,γ2GT4 YUDANHONGSUZENGGAOMIQIEXIANGGUAN。

7. ZHIDANBAIDIANYONG:ZHIDANBAIDIANYONGJIANCEGEZHONGZHIDANBAI(BAOKUODANGUCHUNHETG)ZHUYAOYONGYUGAOZHIXUEZHENGDEFENXING、GUANXINBINGWEIXIANXINGGUJI,YIJIDONGMAIZHOUYANGYINGHUAXINGJIXIANGGUANJIBINGDEFASHENG、FAZHAN、ZHENDUANHEZHILIAO(BAOKUOZHILIAOXINGSHENGHUOFANGSHIGAIBIAN、YINSHIJIDIAOZHIYAOWUZHILIAO)XIAOGUOGUANCHADEYANJIUDENG。

三、现状与展望 
    我国在电泳技术临床应用上与国外相比,存在明显差距。对于电泳项目,国内一般以血清蛋白为主,而国外所做项目包括血清蛋白、尿蛋白、CK、LD、ALP、GGT同工酶、各种脂蛋白的胆固醇/甘油三酯等。对于电泳试剂,欧美这几年均以琼脂糖凝胶电泳片占95%以上,国内仍有40%市场采用醋纤膜电泳片。分析这些差距,有主观因素,也有客观原因。目前国内有不少临床实验室仍采用较落后的电泳设备或手工电泳方法,既不能及时、准确获得分析结果,也使得许多新的检验项目不能开展并应用于临床常规分析,影响了临床相关疾病的诊治和检验医学的发展。也有一些较大规模的医院,虽然购置了先进的自动化电泳系统,但由于宣传介绍不够,临床医生对电泳检测项目了解少而不开检验申请单。

广东11选5 CONGMUQIANLINCHUANGSHIYANSHIDEYAOQIULAIKANDIANYONGYIBIXUJUYOUXIALIEGONGNENG:

(1)QUANZIDONG:BIXUDADAORENYUANLIJIZUOYE,YOUDIANYANGDAOCHUBAOGAOMEIYOURENGONGDONGZUO。

(2)SUDUKUAI:SUOYOUXIANGMUYINGZAI60 minNEIWANCHENGTONGSHIJUBEIJIZHENXIANGMURUCK、LDDENGTONGGONGMEIJIYAXINGXIANGMU。

(3)XIANGMUQUAN:CHULEXUEQINGDANBAI、ZHIDANBAI、XUEHONGDANBAI、CK、LDTONGGONGMEIDENGCHUANTONGXIANGMUWAIBIXUHAINENGWANCHENGNIAODANBAI、NAOJIYEDANBAI、MIANYIGUDING(DANKELONGKANGTI) 、ALPHEGGTTONGGONGMEI、DANGUCHUN(GAOMIDU/JIDIMIDU/DIMIDUZHIDANBAI) 、ZHIDANBAI( a)DENG**XINJIANYANXIANGMU。

广东11选5 (4)MINGANDUGAO:BIXUCAIYONGMINGANDUGAODEDIANYONGPIAN。RUQIONGZHITANGNINGJIAOXITONG,CAINENGDEDAOZHUNQUEDUGAO,FENBIANLVGAODEDIANYONGJIEGUO。