广东11选5

核酸印迹


核酸印迹是一种成熟的技术,用于鉴定先前在凝胶中分离的特定核苷酸序列的存在。(

Southern印迹以其发明者英国生物学家Edwin Southern命名。在Southern印迹中,分析DNA,在Northern印迹中如果是RNA。在这两种情况下,来自完整凝胶的DNA或RNA都将转移到一块硝酸纤维素膜或尼龙膜上。然后将膜暴露于杂交探针,即具有特定序列的单个DNA片段,要确定其在靶DNA(或RNA)中的存在。对探针DNA进行标记,以便可以通过射线照相,荧光或化学发光法对其进行检测。

印迹的**步是核酸从凝胶到膜的转移,这通常使用毛细管转移方法完成。在此过程中,将凝胶放置在纸芯的顶部,该纸芯浸入包含转移缓冲液的容器中。膜夹在凝胶和一堆吸收性材料(通常是干纸巾)之间,该吸收性材料通过毛细管作用使转移缓冲液通过凝胶。然后,凝胶中的核酸分子被缓冲液携带并固定在膜上。真空吸印是另一种越来越流行的吸印程序,因为它速度更快且回收率很高。真空印迹法还使用缓冲液流将核酸带转移到膜上,但是它使用真空而不是毛细管作用来创建该流。

一旦转移完成,最初在凝胶上的所有核酸带就被固定(印迹)在膜上,杂交过程可能开始。将膜与一小段DNA或RNA(探针)一起孵育,该DNA或RNA的序列与膜中特定的DNA或RNA序列互补。这允许探针与膜上的特定DNA片段杂交或结合。探针先前已被标记,通常用放射性原子,荧光染料标记或用酶标记,该酶在与合适的底物孵育后会产生化学发光信号。杂交后,标记的探针允许从膜上许多不同的DNA片段中检测目标DNA片段。